Introdução: O estresse ocupacional, a ansiedade e a depressão são fenômenos de grande impacto em enfermeiros, nos últimos anos. Assim, dentre as estratégias de suporte, está o Mindfulness, que tem comprovada efetividade, na redução do estresse e no sofrimento mental. Objetivo: Analisar os efeitos de um programa para prática de Mindfulness on-line de oito semanas quanto ao estresse percebido, sintomas de ansiedade e depressão de enfermeiros. Método: Ensaio clínico randomizado aleatorizado, com tratamento em paralelo. Recorte multicêntrico: “Programa Iberoamericano de Mindfulness na Enfermagem”, com amostra de 60 enfermeiros assistenciais, distribuídos pelos estados do Brasil. A coleta de dados ocorreu antes (pré-teste) e após (pós-teste) as intervenções. Foram coletadas variáveis sociodemográficas e ocupacionais, dados relacionados ao estresse (Escala de Estresse Percebido), ansiedade (Inventário de Beck para Ansiedade), depressão (Inventário de Beck para Depressão) e avaliada efetividade da prática de Mindfulness (Mindful Attention Awareness Scale). Entre março e abril de 2023, o Grupo Intervenção (41 enfermeiros) recebeu prática on-line de Mindfulness por oito semanas e material complementar, enquanto o Grupo Controle (19 enfermeiros) recebeu guia ilustrado para a gestão do estresse. Os dados foram armazenados em planilhas e analisados pelo Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), versão 25.0, utilizando-se de estatística descritiva e variabilidade, para análise exploratória das variáveis sociodemográficas, de condições de trabalho e saúde. Na comparação intragrupo, utilizaram-se dos testes Welch Two Sample T, t de Student, média e desvio padrão e para identificação dos fatores associados e determinantes do nível de estresse, ansiedade e depressão. Consideraram-se nível de significância de 5% e intervalo de confiança de 95%. Resultados: Houve heterogeneidade entre os grupos, devido à perda de segmento do Grupo Controle. Na análise intragrupo, o perfil dos enfermeiros que compuseram os dois grupos foi majoritariamente feminino, católico, pós-graduado, com vínculo empregatício e trabalhando no turno diurno. Houve diferença estatisticamente significativa na distribuição dos níveis educacionais entre os Grupos Intervenção e Controle (p=0,019). Os resultados mostraram que, na intervenção no Grupo Intervenção, houve redução significativa da ansiedade e depressão, e no aumento da atenção plena no pós-teste (p=0,009), enquanto o Grupo Controle não apresentou mudanças significativas nessas áreas. Em relação à redução do risco relativo, houve queda de 56% no uso de psicotrópicos; em 51%, o risco de interromper a atividade física; em 43%, o risco de aumento da dor; em 15%, o consumo de álcool; e em 7%, o risco de piora na qualidade do sono. Conclusão: a prática de oito semanas de Mindfulness reduziu o estresse percebido, a ansiedade e a depressão no Grupo Intervenção composto por enfermeiros, o que gerou maior atenção plena, entendimento e redução dos riscos: abuso de álcool e psicofármacos, baixa qualidade do sono e interrupção da atividade física, o que favorece o bem-estar e a qualidade de vida dos enfermeiros.