As chalconas são compostos amplamente estudados por suas diversas propriedades farmacológicas, incluindo atividades anti-inflamatória, antimicrobiana, antioxidante, antiviral e antitumoral. Essa classe de moléculas tem despertado crescente interesse, especialmente pela facilidade de modificação estrutural por meio da adição de diferentes radicais, o que pode influenciar significativamente suas atividades biológicas. Em estudos anteriores realizados pelo nosso grupo, uma chalcona hidroxilada sintética, denominada HC-A3, demonstrou potencial citotóxico em diversas linhagens de células cancerosas, com destaque para a linhagem de carcinoma oral de células escamosas (SCC4). Diante desse potencial, o presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos mutagênicos e antimutagênicos da HC-A3 utilizando o modelo de Drosophila melanogaster, por meio do teste de mutação e recombinação somáticas (SMART). Para os ensaios, foram utilizadas três linhagens mutantes de D. melanogaster, portadoras dos seguintes marcadores genéticos: multiple wing hairs (mwh, 3-0,3), flare (flr3, 3-38,8) e ORR (ORR-flr3). Os cruzamentos realizados incluíram o cruzamento padrão (ST, Standard cross) e o cruzamento de alta bioativação (HB, High bioactivation), este último envolvendo linhagens com maior expressão de enzimas do citocromo P450. O teste SMART foi conduzido em dois esquemas distintos de tratamento, com o intuito de avaliar tanto o potencial mutagênico quanto o antimutagênico da HC-A3. Os resultados indicaram que a atividade mutagênica da chalcona HC-A3 está associada à necessidade de ativação metabólica. A ausência de efeitos significativos no cruzamento ST, contrastando com a resposta positiva observada no cruzamento HB, sugere que a genotoxicidade da HC-A3 é mediada por metabólitos reativos gerados pela ação enzimática do citocromo P450. A realização deste estudo contribuiu para uma compreensão mais abrangente e integrada do perfil de segurança e eficácia da chalcona HC-A3, representando um passo importante para seu eventual desenvolvimento como uma nova molécula bioativa de interesse farmacológico.