A lagarta-do-cartucho, Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae), é uma das principais pragas agrícolas em regiões tropicais, causando danos severos em cultivos de algodão, milho e soja. A crescente resistência da praga às culturas Bt, agravada pela baixa implementação de áreas de refúgio e pelo uso contínuo de proteínas Bt já comprometidas, tem dificultado seu controle. Este estudo avaliou a suscetibilidade de S. frugiperda a diferentes combinações de proteínas Bt expressas em cultivares de algodão transgênico, com o objetivo de identificar as piramidações mais eficazes para o controle da praga e propor estratégias de manejo integrado de resistência. Foram conduzidos bioensaios em laboratório utilizando larvas de terceiro ínstar, coletadas em campos de milho Bt, e alimentadas com tecidos foliares de cinco cultivares de algodão: quatro Bt (expressando combinações de Cry1Ac + Cry2Ab2, Cry1Ab + Cry2Ae + Vip3A, Cry1Ac + Cry2Ab2 + Vip3A, Cry1F + Cry1Ac + Vip3A) e um não Bt (controle). As taxas de sobrevivência e mortalidade acumulativa foram analisadas ao longo de sete dias. Os resultados demonstraram que as combinações contendo Vip3A, como Cry1Ac + Cry2Ab2 + Vip3A e Cry1Ab + Cry2Ae + Vip3A, foram significativamente mais eficazes, promovendo alta mortalidade (>60%) e menor tempo médio de sobrevivência das larvas (50% de mortalidade no terceiro e quinto dia, respectivamente). Em contraste, a combinação Cry1F + Cry1Ac + Vip3A apresentou menor eficácia, com mortalidade acumulada de apenas 30%, refletindo a resistência cruzada previamente documentada a Cry1F. Esses achados reforçam a importância de piramidações com modos de ação distintos e toxinas com baixa resistência cruzada, como Vip3A, Cry2Ab2 e Cry2Ae, para o controle de S. frugiperda. Assim, este estudo destaca a necessidade de integrar tecnologias piramidais a práticas de manejo integrado, incluindo monitoramento contínuo das populações locais, rotação de cultivos e conscientização sobre o uso de áreas de refúgio. As combinações envolvendo Vip3A são ferramentas essenciais para prolongar a eficácia das tecnologias Bt e mitigar a evolução da resistência.