Este estudo apresenta uma solução inovadora e acessível para a determinação in situ da concentração de proteínas em amostras biológicas, utilizando a análise colorimétrica de imagem (DIC) em conjunto com um smartphone. Para otimizar o método, uma plataforma de captura de imagens foi projetada e aprimoramentos foram implementados no protocolo do método de Bradford convencional. Além disso, modelos de calibração multivariada foram propostos para detectar e quantificar proteínas em amostras de cultivares de feijão-caupi, utilizando a técnica de espectrofotometria de UV-Vis e Regressão por Mínimos Quadrados Parciais (PLS). Para interpretar o sinal analítico, um estudo exploratório de colorimetria de imagem digital foi realizado. Por fim, os modelos de PLS foram construídos e avaliados no software ChemoStat, utilizando os dados espectrais, e a qualidade dos modelos foi avaliada por meio dos valores de R2, RMSEC, RMSEP e RMSECV. Os resultados obtidos para o modelo de calibração e validação deste estudo foram satisfatórios, tendo em vista que todas as figuras de mérito apresentaram valores adequados para essa modelagem. A comparação de desempenho dos métodos revelou que a análise colorimétrica de imagem (DIC) e a espectrofotometria de UV-Vis alcançaram determinações (r) de 0,9992 e 0,9938, respectivamente, enquanto os limites de detecção (LD) e quantificação (LQ) foram de 10,0 mg L-1 e 30,7 mg L-1 e 0,8 mg L-1 e 2,4 mg L-1, respectivamente. Além disso, a concentração total de proteína em diferentes cultivares de feijão-caupi biofortificado (Aracê, Guariba, Tumucumaque e XiqueXique) foi analisada usando o método proposto, e os resultados foram comparáveis aos do método convencional e os valores reportados na literatura. Esses achados evidenciam que a utilização da plataforma desenvolvida neste trabalho apresenta vantagens e pode ser aplicada em áreas como análise de alimentos, biotecnologia e medicina. Além disso, a execução do método é rápida, apresenta custo moderado e gera mínimos resíduos, fornecendo uma abordagem fácil e acessível para quantificação de proteínas em amostras biológicas.