Considerando o agravante aumento de cepas bacterianas resistentes aos antibióticos disponíveis na prática clínica, cresce a necessidade de alternativas terapêuticas oriundas de produtos natu-rais, que associem eficácia antimicrobiana, atividade antioxidante e seletividade citotóxica. Neste contexto, Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers., conhecida popularmente como “Santa Quité-ria”, tem sido amplamente empregada na medicina tradicional devido às suas propriedades anti-inflamatórias, antimicrobianas e cicatrizantes. Este estudo teve como objetivo caracterizar a composição fitoquímica do extrato etanólico e de suas frações, bem como avaliar suas ativida-des antibacterianas, antioxidantes e citotóxicas por meio de abordagens in vitro e in silico. O extrato etanólico bruto (EBK) foi obtido por maceração com etanol (7:3), sendo posteriormente entregue à fração líquido-líquido para obtenção das frações de acetato de etila (FAE) e hexânica (FHEX). A caracterização espectral foi realizada por UV-Vis. A atividade antibacteriana foi determinada por meio das concentrações inibitórias mínimas (CIM) e bactericida mínima (CBM) contra cepas Gram-positivas e Gram-negativas. A capacidade antioxidante foi avaliada pelos métodos DPPH e ABTS, enquanto a citotoxicidade foi ferida pelo ensaio MTT frente às linhagens tumorais HCT 116 (câncer colorretal humano), MDA-MB-231 (câncer de mama) e L929 (fibroblasto murino – não tumoral). Os espectros UV-Vis revelaram a presença predomi-nante de flavonoides nas frações mais polares e de pigmentos clorofilínicos na fração hexânica. Quanto à atividade antibacteriana, todas as amostras apresentaram CIM e CBM ≥ 2000 μg/mL, com atividade limitada e efeito predominantemente bacteriostático. Nos ensaios antioxidantes, a FAE apresentou maior capacidade de sequestro de radicais livres, com valores de IC₅₀ de 42,26 μg/mL (DPPH) e 19,09 μg/mL (ABTS), destacando-se em relação ao EBK e à FHEX. Nos ensaios de citotoxicidade, as amostras demonstraram maior seletividade para as linhagens tumorais HCT-116 e MDA-MB-231, proporcionando uma ação citotóxica preferencial sobre células cancerosas. Especificamente, o FAE obstruiu em 93% as previsões celulares da linha-gem HCT-116, enquanto a FHEX promoveu uma redução de 75% nessa mesma linhagem, ca-racterizando forte atividade antiproliferativa. A fração acetato de etila de K. pinnata concentra os compostos bioativos da planta, evidenciando seu potencial terapêutico.