RESUMO: A interação entre Enterococcus faecalis e Candida albicans aumenta a virulência de biofilmes podendo estar associada a infecções endodônticas persistentes e à ineficácia de medicações intracanais. Este trabalho objetiva avaliar o efeito antimicrobiano da apitoxina (veneno de abelha) em modelos de biofilmes mono e dual-espécie de E. faecalis e C. albicans. Serão determinadas as concentrações inibitórias mínimas (CIM) e as concentrações bactericidas/fungicidas mínimas (CBM/CFM). O ensaio da curva de morte será realizado por meio da contagem de colônias quando da aplicação da CBM/CFM da apitoxina, nos tempos de 0, 3, 6, 12 e 24 horas. Para o efeito sobre os biofilmes, serão testadas as concentrações de 1/2 CIM, CIM e 2×CIM da apitoxina sobre biofilmes mono e dual-espécie dos micro-organismos estudados (crescidos nos tempos de 24, 48 e 42 horas), durante o tempo de exposição de 48 h. Após os tratamentos, a viabilidade celular será avaliada por meio de contagem de colônias, coloração por cristal violeta (CV), redução de XTT, microscopia eletrônica de varredura, confocal a laser e de força atômica. A influência de concentrações sub-CIM na adesão microbiana será testada em placas de 96 poços utilizando-se o método do CV. A expressão de genes relacionados a fatores de virulência, sob tratamento com apitoxina em concentrações subinibitórias, serão por avaliados por reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (q-PCR), sobre os genes que codificam os seguintes fenótipos: sistema de adesão e formação de biofilme para E. Faecalis e presença de hifas, sistemas de adesão e formação de biofilme para C. albicans. A citotoxicidade será avaliada em fibroblastos murino NIH 3T3 e membrana corioalantóide de embrião de galinha (HET-CAM). Os dados obtidos serão avaliados no software GraphPad Prism® versão 8.0.1, utilizando One-way ANOVA seguida do pós-teste de Tukey. |